Por favor, use este identificador para citar o enlazar este Item:http://hdl.handle.net/20.500.12105/7974
Título
Procedimientos de amplificación de genoma y mezclas de oligonucleótidos iniciadores para la detección y la identificación de secuencias genómicas relacionadas
Autor(es)
Tenorio, Antonio ISCIII
Fecha de publicación
1994-03-16
Cita
ES2048652 A1
Idioma
Español
Tipo de documento
patent
Resumen
Procedimientos de amplificacion de genoma para la deteccion e identificacion de secuencias genomicas relacionadas. Al menos uno de los iniciadores que intervienen en la deteccion se diseña como mezcla simple de oligonucleotidos que contienen secuencias homologas seleccionadas de entre las secuencias genomicas relacionadas que se quieren amplificar, y que pueden contener secuencias no homologas y/o alteraciones respecto a las secuencias conocidas. Al menos una de los iniciadores que intervienen en la reaccion de identificacion, consecutiva o no a la de deteccion, se diseña como mezcla simple de oligonucleotidos que terminan en su extremo 3'' en una secuencia especifica de la secuencia que se quiere identificar, y que pueden contener alteraciones respecto a las secuencias conocidas; los iniciadores estan diseñados de manera que los fragmentos especificos amplificados son diferentes entre si por tamaño uotro marcaje fisico o quimico. Los nuevos procedimientos son especialmente utiles para la deteccion y la identificacion de agentes infecciosos relacionados en una unica reaccion multiple. Reivindicaciones:
1. Un procedimiento de amplificación de genoma para la detección de secuencias genómicas relacionadas en una única mezcla de reacción, caracterizado por que se realizan sucesivos ciclos de reacción en los que se desnaturaliza el genoma presente en la reacción, se hibridan a las hebras de genoma desnaturalizado los iniciadores de la reacción de polimerización de genoma y se realiza una reacción de polimerización de genoma, en que al menos uno de los iniciadores que intervienen en la reacción se obtiene de manera que
es una mezcla simple de oligonucleótidos, basándose esencialmente cada uno de dichos oligonucleótidos en secuencias seleccionadas de entre cada una de las secuencias relacionadas que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla incluye, preferentemente en su extremo 3', secuencias homólogas seleccionadas de entre las secuencias relacionadas que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla puede incluir, preferentemente en su extremo 5', secuencias no homólogas seleccionadas de entre las secuencias relacionadas que se quieren amplificar, y
uno o más de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla pueden diferenciarse de las secuencias conocidas que se quieren amplificar en la menos un nucleótido.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado además por que posteriormente se identifican las secuencias amplificadas por hibridación o por una reacción de amplificación consecutiva.
3. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado además porque se utilizan para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
4. Un procedimiento de amplificación de genoma para la detección y la identificación de secuencias genómicas en una única mezcla de reacción, caracterizado porque se realizan sucesivos ciclos de reacción en los que se desnaturaliza el genoma presente en la reacción, se hibridan a las hebras de genoma desnaturalizado los iniciadores de la reacción de polimerización de genoma y se realiza una reacción de polimerización de genoma, en que al menos uno de los iniciadores que intervienen en la reacción se obtiene de manera que
es una mezcla simple de oligonucleótidos, basándose esencialmente cada uno de dichos oligonucleótidos en secuencias seleccionadas de entre cada una de las secuencias que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla incluye, preferentemente en su extremo 3', secuencias específicas de cada una de las secuencias que se quieren tipificar en la reacción de amplificación,
los fragmentos específicos amplificados son diferentes entre sí por tamaño o por diferente marcaje físico o químico de cada uno de sus oligonucleótidos componentes, y
uno o más de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla pueden diferenciarse de las secuencias conocidas que se quieren amplificar en la menos un nucleótido.
5. Un procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado además porque se utiliza para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
6. Un procedimiento de detección e identificación desecuencias genómicas relacionadas en dos reacciones de amplificación consecutivas, caracterizado por
hacerse una primera reacción de amplificación de, genoma según la reivindicación 1 y
tomando como substrato el producto de la primera reacción de amplificación, realizar una segunda reacción de amplificación de genoma según la reivindicación 4.
7. Un procedimiento según la reivindicación 6 caracterizado además porque se utiliza para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
8. Procedimientos según las reivindicaciones 1 a 7 caracterizados además
porque las secuencias de los oligonucleótidos componentes de las mezclas se seleccionan de entre las secuencias de los miembros de la familia Retroviridae, especialmente de los genes gag y pol, y
porque se utilizan para la detección y la identificación de Retroviridae, especialmente de Retroviridae capaces de infectar a humanos.
9. Procedimientos según las reivindicaciones 1 a 7 caracterizados además
porque las secuencias de los oligonucleótidos componentes de las mezclas se seleccionan de entre las secuencias de los miembros de la familia Herpesviridae, especialmente del bloque conservado que comprende los genes homólogos a los genes UL27, UL28, UL29 y UL30 del virus herpes simplex tipo 1, y
porque se utilizan para la detección y la identificación de Herpesviridae, especialmente de herpesviridae capaces de infectar a humanos. Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
Fecha de prioridad
1992-06-05
Palabras clave
Titularidad de la patente
Instituto de Salud Carlos III
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