Nuevo inhibidor de serina proteasa y su uso

Abstract

La invención se refiere a una nueva proteína, identificada mediante rastreo de una genoteca de cDNA de Anisakis simplex, así como a su secuencia codificante y a sus vectores de expresión. Dicha proteína, miembro de la familia de las serpinas, es capaz de inhibir de manera dependiente de dosis a la trombina humana, sin afectar al factor Xa de la coagulación, y sin que la heparina altere su actividad inhibitoria. Así, la invención se refiere también al uso de esta proteína para la preparación de un medicamento, especialmente si se trata de un anticoagulante. Su administración tendría especial interés en los casos de hipercoagulopatías asociadas a la administración de heparina. Además, representa una alternativa a los anticoagulantes derivados de la cumarina, a los que podría sustituir en cualquiera de las situaciones en las que se administran.

REIVINDICACIONES: 1. Un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos comprende:

a) la secuencia representada por SEQ ID NO:3, o b) una secuencia idéntica al menos en un 40% a SEQ ID NO:3 que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, o c) la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2, o d) una secuencia idéntica al menos en un 40% a SEQ ID NO:2, que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana. 2. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:3.

3. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, en el que dicha secuencia es idéntica a SEQ ID NO:3 en un porcentaje que se selecciona del grupo del 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.

4. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2.

5. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, en el que dicha secuencia es idéntica a SEQ ID NO:2 en un porcentaje que se selecciona del grupo del 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.

6. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es una proteína de fusión que comprende la secuencia de una segunda proteína.

7. Polipéptido según la reivindicación 6, en el que la segunda proteína es la glutatión-S-transferasa.

8. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya capacidad de inhibición de la trombina humana no se ve afectada por la presencia de heparina.

9. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que presenta también capacidad de inhibir las catepsinas G y L.

10. Una molécula aislada de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una serpina con capacidad de inhibir la trombina humana seleccionada del grupo que consiste en:

a) una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia polipeptídica idéntica al menos en un 40% a la secuencia representada por SEQ ID NO:3 b) una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia polipeptídica idéntica al menos en un 40% a la secuencia representada por SEQ ID NO:2; c) una molécula de ácido nucleico complementaria a una de las anteriores. 11. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende una secuencia que codifica una secuencia polipeptídica idéntica a la representada por SEQ ID NO:3.

12. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende una secuencia que codifica una secuencia polipeptídica idéntica a la representada por SEQ ID NO:2.

13. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 12, que comprende la secuencia representada por SEQ ID NO: 1.

14. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende un fragmento de secuencia que codifica una secuencia polipeptídica que es idéntica a la representada por SEQ ID NO:2 al menos en un porcentaje que se selecciona del grupo de 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.

15. Un vector de expresión que comprende la secuencia de ADN correspondiente a la molécula de ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14 unida operativamente a una secuencia de control de la expresión.

16. Una célula hospedadora transformada con un vector de expresión de la reivindicación 15.

17. Célula hospedadora según la reivindicación 16, que es una bacteria, una levadura, o una célula eucariótica.

18. Un método para producir una proteína que comprende las etapas de:

a) cultivar la célula hospedadora transformada con un vector de expresión de la reivindicación 15 que permite la expresión del polipéptido con capacidad de inhibir la trombina humana codificado en dicho vector de expresión; b) purificar el polipéptido sintetizado en la etapa a) de la célula o del medio celular. 19. Uso de un polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para la preparación de un medicamento.

20. Uso según la reivindicación 19, en el que el medicamento está destinado a ser utilizado como anticoagulante.

21. Uso según la reivindicación 20, en el que el medicamento está destinado a pacientes en los que se sospeche que puede haber alguna alteración en proteínas de la cascada de coagulación distintas de la trombina, a pacientes inmunodeprimidos, a pacientes con trastornos hepáticos, a pacientes con coagulopatías de consumo con coagulación intravascular diseminada, a pacientes que presenten estados de hipercoagulabilidad asociados al uso de heparina o a pacientes con déficit de antitrombina III.

22. Uso según la reivindicación 20, en el que el medicamento está destinado a ser administrado como anticoagulante durante períodos perioperatorios.

23. Uso según la reivindicación 22, en el que el medicamento está destinado a ser administrado durante el período perioperatorio de la cirugía cardiopulmonar, y de la cirugía traumatológica.

24. Uso según la reivindicación 23, en el que el medicamento está destinado a ser administrado durante el período perioperatorio de la cirugía traumatológica en tratamientos de sustitución completa de cadera y rodilla.

25. Uso según la reivindicación 19, en el que el medicamento está destinado a pacientes con síndrome coronario agudo, fibrilación auricular, enfermedad coronaria crónica, prótesis mecánicas o articulares y válvulas cardíacas o vasculares.

26. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, en el que el medicamento está destinado a ser administrado sin la administración simultánea de heparina.

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