Proteína F del VRSH en conformación pre-fusión estabilizada y anticuerpos neutralizantes específicos frente a la misma.

Abstract

La presente invención proporciona una proteína de fusión (proteína F) del virus respiratorio sincitial humano (VRSH) en conformación pre-fusión estabilizada, útil para identificar o diseñar anticuerpos y otras moléculas que se unan a ella para el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de infecciones producidas por virus de la familia Paramyxoviridae, preferiblemente del género Pneumovirus, más preferiblemente por el VRSH. La presente invención se refiere también a un método de obtención de esta proteína así como a anticuerpos y a aptámeros frente a la misma, los cuales son útiles para el diagnóstico, tratamiento y/o prevención de las infecciones mencionadas.

REIVINDICACIONES: 1. Proteína F del VRSH en conformación pre-fusión que presenta al menos un 80% de homología con la SEQ ID NO: 1, que comprende:

a. al menos un puente disulfuro intermonomérico en la región que comprende los aminoácidos 450 a 550 de su secuencia aminoacídica, y

b. al menos dos aminoácidos básicos del punto de corte de furina que comprende los aminoácidos 106 a 109 de su secuencia aminoacídica y al menos cuatro aminoácidos básicos del punto de corte de furina que comprende los aminoácidos 131 a 136 de su secuencia aminoacídica, sustituidos por asparagina o por glutamina.

2. Proteína según la reivindicación 1 que comprende dos puentes disulfuro intermonoméricos formados mediante la sustitución de los aminoácidos Leu481, Asp489, Ser509 y Asp510 por cisteínas.

3. Proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende los aminoácidos básicos Arg106, Arg108, Arg109, Lys131, Lys132, Arg133, Lys134, Arg135 y Arg136 sustituidos por asparagina.

4. Proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que además comprende una cola de histidinas en el extremo C-terminal.

5. Proteína según la reivindicación 4 donde la cola de histidinas se ha formado mediante la adición de la SEQ ID NO: 2 en el extremo C-terminal de la proteína.

6. Proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que consiste en la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 3.

7. Secuencia nucleotídica aislada que codifica para la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Anticuerpo frente a la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

9. Aptámero frente a la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

10. Método de obtención de la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que comprende:

a. sustituir, en una secuencia aminoacídica de la proteína F del VRSH que presenta al menos un 80% de homología con la SEQ ID NO: 1, al menos dos aminoácidos básicos del punto de corte de furina que comprende los aminoácidos 106 a 109 y al menos cuatro aminoácidos básicos del punto de corte de furina que comprende los aminoácidos 131 a 136, por asparagina o por glutamina,

b. introducir al menos un puente disulfuro intermonomérico en la región que comprende los aminoácidos 450 a 550 de la secuencia aminoacídica de la proteína F del VRSH del paso (a) ,

c. expresar la proteína F del VRSH modificada en los pasos (a) y (b) en un sistema de expresión, y

d. purificar la proteína expresada en el paso (c) .

11. Método según la reivindicación 10, donde los aminoácidos básicos del paso (a) son Arg106, Arg108, Arg109, Lys131, Lys132, Arg133, Lys134, Arg135 y Arg136 y se sustituyen por asparagina.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11, donde en el paso (b) se introducen dos puentes disulfuro intermonoméricos mediante la sustitución de los aminoácidos Leu481, Asp489, Ser509 y Asp510 de la secuencia aminoacídica de la proteína F del VRSH del paso (a) por cisteínas.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, que además comprende añadir una cola de histidinas en el extremo C-terminal de la secuencia aminoacídica de la proteína F del VRSH del paso (b) .

14. Método según la reivindicación 13, donde la cola de histidinas se añade mediante la adición de la SEQ ID NO: 2 en el extremo C-terminal de la secuencia aminoacídica de la proteína F del VRSH del paso (b) .

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14 donde el sistema de expresión del paso (c) es el virus vaccinia.

16. Uso de la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la identificación o diseño de compuestos o composiciones para el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de infecciones producidas por virus pertenecientes al género Pneumovirus.

17. Uso de la proteína según la reivindicación 16 donde el virus es el VRSH.

18. Uso de la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la elaboración de un medicamento.

19. Uso de la proteína según la reivindicación 18 para la elaboración de un medicamento para el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de infecciones producidas por virus pertenecientes al género Pneumovirus.

20. Uso de la proteína según la reivindicación 19 donde el virus es el VRSH.

21. Uso de la proteína según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20 donde el medicamento es una vacuna.

22. Uso del anticuerpo según la reivindicación 8 o del aptámero según la reivindicación 9 para la detección de la proteína F de virus pertenecientes al género Pneumovirus.

23. Uso del anticuerpo o del aptámero según la reivindicación 22 donde el virus es el VRSH.

24. Uso del anticuerpo según la reivindicación 8 o del aptámero según la reivindicación 9 para la elaboración de un medicamento.

25. Uso del anticuerpo o del aptámero según la reivindicación 24 para la elaboración de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de infecciones producidas por virus pertenecientes al género Pneumovirus.

26. Uso del anticuerpo o del aptámero según la reivindicación 25 donde el virus es el VRSH.

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