ISCIII - Patenteshttp://hdl.handle.net/20.500.12105/20652024-03-29T15:01:35Z2024-03-29T15:01:35ZCompuestos tricíclicos sustituidos bilateralmente para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) y otras enfermedadesGallego-Sala, JoseFustero, SantosAlcamí, JoséGonzalez-Bulnes, LuisIbañez, IgnacioCatalan-Muñoz, SilviaPrado, SilviaCantero, AngelBarrio, Pablohttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81352021-05-18T15:51:10Z2018-06-13T00:00:00ZCompuesto de Fórmula (I)**Fórmula**
o una sal, éster, solvato o hidrato farmacéutico del mismo.
en la que
A, B y C son benceno,
R1 y R2 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno A y en meta en relación con el átomo de carbono de A unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R3 y R4 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno B y en orto en relación con el átomo de carbono de B unido al benceno A; y se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilamida (C1- C6), éster de alquilo (C1-C6), hidroxialquilo (C1-C6), haloalquilo (C1-C6), alcoxialquilo (C1-C6), alquilo (C1-C8), con la condición de que al menos uno de R3 y R4 no sea hidrógeno;
R5 y R6 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno C y en orto en relación con el átomo de carbono de C unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R7 y R8 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi (C1-C10), alquilamina (C1- C10), alquilguanidina (C1-C10), alquilamida (C1-C10), éster de alquilo (C1-C10), hidroxialquilo (C1-C10),
alcoxialquilo (C1-C10), haloalquilo (C1-C10), alquilo (C1-C10), aril alcoxi y éster de arilo REIVINDICACIONES: 1. Compuesto de Fórmula (I)
R7
I
R1------A------R:
R3-------B------R4
I
R1-----C----RG
I
R8
(I)
o una sal, éster, solvato o hidrato farmacéutico del mismo. en la que
A, B y C son benceno,
1 J 2
R y R están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno A y en meta en relación con el átomo de carbono de A unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R3 y R4 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno B y en orto en relación con el átomo de carbono de B unido al benceno A; y se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilamida (C1- C6), éster de alquilo (C1-C6), hidroxialquilo (C1-C6), haloalquilo (C1-C6), alcoxialquilo (C1-C6), alquilo (C1-C8), con la condición de que al menos uno de R3 y R4 no sea hidrógeno;
R5 y R6 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno C y en orto en relación con el átomo de carbono de C unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R7 y R8 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi (C1-C10), alquilamina (C1- C10), alquilguanidina (C1-C10), alquilamida (C1-C10), éster de alquilo (C1-C10), hidroxialquilo (C1-C10), alcoxialquilo (C1-C10), haloalquilo (C1-C10), alquilo (C1-C10), aril alcoxi y éster de arilo; REIVINDICACIONES:
1. Compuesto de Fórmula (I)
R7
I
R1------A------R:
R3-------B------R4
I
R1-----C----RG
I
R8
(I)
o una sal, éster, solvato o hidrato farmacéutico del mismo. en la que
A, B y C son benceno,
1 J 2
R y R están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno A y en meta en relación con el átomo de carbono de A unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R3 y R4 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno B y en orto en relación con el átomo de carbono de B unido al benceno A; y se seleccionan independientemente entre hidrógeno, alquilamida (C1- C6), éster de alquilo (C1-C6), hidroxialquilo (C1-C6), haloalquilo (C1-C6), alcoxialquilo (C1-C6), alquilo (C1-C8), con la condición de que al menos uno de R3 y R4 no sea hidrógeno;
R5 y R6 están en disustitución 1,3 bilateral uno con respecto al otro en el benceno C y en orto en relación con el átomo de carbono de C unido al benceno B; y se seleccionan independientemente entre aminometilo, aminoetilo y aminopropilo opcionalmente sustituidos;
R7 y R8 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi (C1-C10), alquilamina (C1- C10), alquilguanidina (C1-C10), alquilamida (C1-C10), éster de alquilo (C1-C10), hidroxialquilo (C1-C10), alcoxialquilo (C1-C10), haloalquilo (C1-C10), alquilo (C1-C10), aril alcoxi y éster de arilo
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado entre: 2",3,5,6"-tetraquis(2-aminoetil)-4"-metoxi-2',6'-dimetil-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol 2,2',2",2"'-(4"-(benciloxi)-4-metoxi-3',5'-dimetil-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-tetrail)tetraetanamina 2",3,5,6"-tetraquis(2-aminoetil)-2'-etil-4"-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol 2,2',2",2"'-(4"-(benciloxi)-3'-etil-4-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-tetrail)tetraetanamina 2",3,5,6"-tetraquis(2-aminoetil)-2',6'-dietil-4"-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol 2,2',2",2",-(4"-(benciloxi)-3',5-dietil-4-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-tetrail)tetraetanamina
o una sal, éster, solvato o hidrato farmacéutico del mismo.
3. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior para su uso como medicamento.
4. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la infección por VIH-1; infecciones causadas por VIH-2, el virus del síndrome respiratorio agudo grave, el virus de la hepatitis C, el virus de la fiebre amarilla, el virus del dengue, el virus del Nilo Occidental, el virus de la polio, el virus de la gripe, el virus del ébola, el virus paragripal humano, el rotavirus o por bacterias grampositivas y gramnegativas; el neuroblastoma, el cáncer de próstata, el cáncer de ovario, el cáncer de mama, el cáncer de cabeza y cuello, el mieloma múltiple, el cáncer de células renales, el linfoma de Burkitt, el cáncer de colon, el hepatocarcinoma; infecciones por el virus del herpes simple, la hipertensión, la psoriasis, el asma, el lupus, la esclerosis múltiple, la artritis reumatoide, la fibromialgia, la epilepsia, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
5. Un compuesto para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4 para el tratamiento y/o la prevención de infecciones por VlH-1.
6. Un compuesto para su uso de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4 para el tratamiento y/o la prevención de infecciones bacterianas.
7. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 o una sal, éster, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
8. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la infección por VIH-1; infecciones causadas por VIH-2, el virus del síndrome respiratorio agudo grave, el virus de la hepatitis C, el virus de la fiebre amarilla, el virus del dengue, el virus del Nilo Occidental, el virus de la polio, el virus de la gripe, el virus del ébola, el virus paragripal humano, el rotavirus o por bacterias grampositivas y gramnegativas; el neuroblastoma, el cáncer de próstata, el cáncer de ovario, el cáncer de mama, el cáncer de cabeza y cuello, el mieloma múltiple, el cáncer de células renales, el linfoma de Burkitt, el cáncer de colon, el hepatocarcinoma; infecciones por el virus del herpes simple, la hipertensión, la psoriasis, el asma, el lupus, la esclerosis múltiple, la artritis reumatoide, la fibromialgia, la epilepsia, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
9. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 formulada para la administración parenteral, oral, tópica, nasal, vaginal o rectal.
10. Una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 8 formulada para la administración parenteral, oral, tópica, nasal, vaginal o rectal.
11. Método para la preparación de los compuestos de fórmula (I) como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, que comprende la formación de enlaces C-C secuenciales a través del acoplamiento de Suzuki catalizado por paladio de haluros, triflatos de arilo y ésteres borónicos de los anillos A, B y C sustituidos bilateralmente donde R1, R2, R5 y R6 de la molécula final de fórmula (I) son introducidos por los derivados de haluro de A y C y R3 y R4 se introducen por el éster borónico de B.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2018-06-13T00:00:00ZUso de seconeolitsina y N-metil-seconeolitsina para la fabricación de medicamentosde la Campa, Adela GGarcia-Esteban, Maria TeresaBlaquez, Amparohttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81342021-05-18T15:02:35Z2011-07-20T00:00:00ZUso de los alcaloides fenantrénicos seconeolitsina y N-metil-seconeolitsina para la fabricación de medicamentos. Más concretamente, se describe el uso de los citados compuestos para fabricar antibióticos, especialmente para el tratamiento de enfermedades producidas por bacterias Gram-positivas, preferiblemente Streptococcus pneumoniae o Staphylococcus aureus. Tiene especial relevancia su aplicación para elaborar medicamentos para el tratamiento de la neumonía.; REIVINDICACIONES: 1. Uso de compuestos de fórmula I:
(Imagen de detalle en el PDF)
donde R1 = H ó CH3,
para la fabricación de un medicamento.
2. Uso, según la reivindicación 1, en el que R1 = H y el compuesto es seconeolitsina.
3. Uso, según la reivindicación 1, en el que R1 = CH3 y el compuesto es N-metil-seconeolitsina.
4. Uso, según las reivindicaciones 1-3, en el que el medicamento es un antibiótico.
5. Uso, según la reivindicación 4, en el que el antibiótico es efectivo frente a bacterias Gram-positivas.
6. Uso, según las reivindicaciones 1-5, en el que dichos medicamentos están diseñados para ser administrados por vía oral.
7. Uso, según las reivindicaciones 1-5, en el que dichos medicamentos están diseñados para ser administrados por vía parenteral.
8. Uso, según las reivindicaciones 5-7, en el que la bacteria Gram-positiva es Streptococcus pneumoniae y las enfermedades producidas son: neumonía, bronquitis crónica, meningitis, otitis medias o sinusitis.
9. Uso según la reivindicación 8, para el tratamiento de la neumonía.
10. Uso según la reivindicación 8, para el tratamiento de la bronquitis crónica.
11. Uso según la reivindicación 8, para el tratamiento de la meningitis.
12. Uso, según la reivindicación 8, para el tratamiento de la otitis media.
13. Uso, según la reivindicación 8, para el tratamiento de la sinusitis.
14. Uso, según las reivindicaciones 5-7, en el que la bacteria Gram-positiva es Staphylococcus aureus y las enfermedades producidas son: infecciones nosocomiales, infecciones por herida quirúrgica, osteomielitis, artritis séptica, infección cutánea, endocarditis o meningitis.
15. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de las infecciones nosocomiales.
16. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de las infecciones por herida quirúrgica.
17. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de la osteomielitis.
18. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de la artritis séptica.
19. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de la infección cutánea.
20. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de la endocarditis.
21. Uso, según la reivindicación 14, para el tratamiento de la meningitis.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2011-07-20T00:00:00ZNuevo inhibidor de serina proteasa y su usoGarate, TeresaPerteguer-Prieto, Maria JesusRodriguez, EsperanzaValdivieso, Elizabethhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81322021-05-18T15:50:58Z2012-02-13T00:00:00ZLa invención se refiere a una nueva proteína, identificada mediante rastreo de una genoteca de cDNA de Anisakis simplex, así como a su secuencia codificante y a sus vectores de expresión. Dicha proteína, miembro de la familia de las serpinas, es capaz de inhibir de manera dependiente de dosis a la trombina humana, sin afectar al factor Xa de la coagulación, y sin que la heparina altere su actividad inhibitoria. Así, la invención se refiere también al uso de esta proteína para la preparación de un medicamento, especialmente si se trata de un anticoagulante. Su administración tendría especial interés en los casos de hipercoagulopatías asociadas a la administración de heparina. Además, representa una alternativa a los anticoagulantes derivados de la cumarina, a los que podría sustituir en cualquiera de las situaciones en las que se administran.; REIVINDICACIONES: 1. Un polipéptido cuya secuencia de aminoácidos comprende:
a) la secuencia representada por SEQ ID NO:3, o
b) una secuencia idéntica al menos en un 40% a SEQ ID NO:3 que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, o
c) la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2, o
d) una secuencia idéntica al menos en un 40% a SEQ ID NO:2, que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana.
2. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:3.
3. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, en el que dicha secuencia es idéntica a SEQ ID NO:3 en un porcentaje que se selecciona del grupo del 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.
4. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende la secuencia de aminoácidos representada por SEQ ID NO:2.
5. Polipéptido según la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos que presenta estructura de serpina con capacidad de inhibir a la trombina humana, en el que dicha secuencia es idéntica a SEQ ID NO:2 en un porcentaje que se selecciona del grupo del 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.
6. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es una proteína de fusión que comprende la secuencia de una segunda proteína.
7. Polipéptido según la reivindicación 6, en el que la segunda proteína es la glutatión-S-transferasa.
8. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, cuya capacidad de inhibición de la trombina humana no se ve afectada por la presencia de heparina.
9. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que presenta también capacidad de inhibir las catepsinas G y L.
10. Una molécula aislada de ácido nucleico que comprende una secuencia que codifica una serpina con capacidad de inhibir la trombina humana seleccionada del grupo que consiste en:
a) una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia polipeptídica idéntica al menos en un 40% a la secuencia representada por SEQ ID NO:3
b) una secuencia de ácido nucleico que codifica una secuencia polipeptídica idéntica al menos en un 40% a la secuencia representada por SEQ ID NO:2;
c) una molécula de ácido nucleico complementaria a una de las anteriores.
11. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende una secuencia que codifica una secuencia polipeptídica idéntica a la representada por SEQ ID NO:3.
12. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende una secuencia que codifica una secuencia polipeptídica idéntica a la representada por SEQ ID NO:2.
13. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 12, que comprende la secuencia representada por SEQ ID NO: 1.
14. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 10, que comprende un fragmento de secuencia que codifica una secuencia polipeptídica que es idéntica a la representada por SEQ ID NO:2 al menos en un porcentaje que se selecciona del grupo de 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99, 5% y 99, 9%.
15. Un vector de expresión que comprende la secuencia de ADN correspondiente a la molécula de ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14 unida operativamente a una secuencia de control de la expresión.
16. Una célula hospedadora transformada con un vector de expresión de la reivindicación 15.
17. Célula hospedadora según la reivindicación 16, que es una bacteria, una levadura, o una célula eucariótica.
18. Un método para producir una proteína que comprende las etapas de:
a) cultivar la célula hospedadora transformada con un vector de expresión de la reivindicación 15 que permite la expresión del polipéptido con capacidad de inhibir la trombina humana codificado en dicho vector de expresión;
b) purificar el polipéptido sintetizado en la etapa a) de la célula o del medio celular.
19. Uso de un polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para la preparación de un medicamento.
20. Uso según la reivindicación 19, en el que el medicamento está destinado a ser utilizado como anticoagulante.
21. Uso según la reivindicación 20, en el que el medicamento está destinado a pacientes en los que se sospeche que puede haber alguna alteración en proteínas de la cascada de coagulación distintas de la trombina, a pacientes inmunodeprimidos, a pacientes con trastornos hepáticos, a pacientes con coagulopatías de consumo con coagulación intravascular diseminada, a pacientes que presenten estados de hipercoagulabilidad asociados al uso de heparina o a pacientes con déficit de antitrombina III.
22. Uso según la reivindicación 20, en el que el medicamento está destinado a ser administrado como anticoagulante durante períodos perioperatorios.
23. Uso según la reivindicación 22, en el que el medicamento está destinado a ser administrado durante el período perioperatorio de la cirugía cardiopulmonar, y de la cirugía traumatológica.
24. Uso según la reivindicación 23, en el que el medicamento está destinado a ser administrado durante el período perioperatorio de la cirugía traumatológica en tratamientos de sustitución completa de cadera y rodilla.
25. Uso según la reivindicación 19, en el que el medicamento está destinado a pacientes con síndrome coronario agudo, fibrilación auricular, enfermedad coronaria crónica, prótesis mecánicas o articulares y válvulas cardíacas o vasculares.
26. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, en el que el medicamento está destinado a ser administrado sin la administración simultánea de heparina.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2012-02-13T00:00:00ZMétodo de obtención de anticuerpos anti-hHDC y aplicaciones de los mismosDominguez-Rodriguez, MercedesTorao-Garcia, AlfredoMoreno-Iruela, InmaculadaDiez-Lorenzo, ManuelaSanchez-Jimenez, Francisca MariaUrdiales-Ruiz, Jose Luishttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81312021-05-18T15:44:34Z2009-05-08T00:00:00ZLa presente invención proporciona un método para la obtención de anticuerpos, mono y/o policlonales, que interaccionan frente a la histidina descarboxilasa humana (hHDC), así como los polinucleótidos y polipéptidos necesarios para llevarlo a cabo. Del mismo modo, los usos de los mencionados anticuerpos, así como los kits de diagnóstico de los que formen parte también son objeto de la presente invención.; REIVINDICACIONES: 1. Polinucleótido, capaz de codificar un polinpéptido capaz de generar de anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC, cuya secuencia es elegida del grupo:
a.Secuencia que comprende SEQ ID 1
b.Secuencia que consiste en SEQ ID 1 o comprende fragmentos de ésta.
c.Secuencia que difiera de las secuencias a o b debido a la degeneración del código genético.
d.Secuencias que compartan al menos un 80%, 90%, 95% ó 98% de homología con cualquiera de las secuencias anteriores.
2. Polipéptido, según la reivindicación 1, capaz de generar anticuerpos específicos frente a hHDC y cuya secuencia es elegida del grupo:
a.Secuencia que comprende SEQ ID 2
b.Secuencia que consiste en SEQ ID 2 o comprende fragmentos de ésta.
c.Secuencia que comparta al menos un 80%, 90%, 95% ó 98% de homología la secuencia a o b.
3. Anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC, en donde dichos anticuerpos interaccionan específicamente frente cualquiera de los polipéptidos de la reivindicación 2.
4. Uso de cualquiera de los polipéptidos según la reivindicación 2 para la generación de anticuerpos o fragmentos de los mismos específicos frente a hHDC.
5. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por técnicas de generación de hibridomas.
6. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por la tecnología de "phage display".
7. Uso según la reivindicación 4 en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos son obtenidos por inmunización de mamíferos no humanos.
8. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento.
9. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la degeneración neurológica.
10. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la anafilaxis y/o procesos alérgicos.
11. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento la degeneración de epitelios digestivos.
12. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento para el tratamiento de diferentes tipos de cáncer.
13. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de procesos infecciosos.
14. Uso de los anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3 para el diagnóstico in vitro de enfermedades.
15. Kit de diagnóstico que comprende la utilización de anticuerpos o fragmentos de los mismos según la reivindicación 3.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2009-05-08T00:00:00ZUn anticuerpo monoclonal específico frente al antígeno H:1,2 de Salmonella enterica serotipo Typhimurium que presenta reactividad cruzada con Salmonella enterica serotipo 4,5,12:i:-, línea celular productora, y su uso.Echeita, AuroraGaraizar, JavierRementeria, AitorVivanco, Ana BelenHerrera-León, Silviahttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81302021-05-18T15:25:14Z2010-12-29T00:00:00ZEsta invención se refiere a un anticuerpo monoclonal específico frente al antígeno H:1,2 presente en Salmonella entérica serotipo Typhimurium con reactividad cruzada frente al serotipo 4,5,12:i:-, una línea celular murina productora de dicho anticuerpo monoclonal y la aplicación de dicho anticuerpo monoclonal mediante técnicas inmunológicas para reconocer antígenos asociados a flagelo específicos de Salmonella enterica serotipo Typhimurium y Salmonella enterica serotipo 4,5,12:i:-.; REIVINDICACIONES: 1. Un procedimiento para la obtención de un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo caracterizado porque comprende las siguientes etapas:
a) inmunizar un animal con el antígeno flagelar H:1, 2 aislado;
b) inmortalizar los linfocitos B procedentes de los ratones inmunizados en el paso anterior, mediante su fusión con células de mieloma para dar lugar a un hibridoma;
c) aislamiento de aquellos clones de hibridomas que secretan anticuerpos monoclonales reactivos frente al antígeno flagelar H:1, 2;
d) cultivo de dichos clones celulares y posterior obtención del anticuerpo monoclonal de interés, fragmento o variante del mismo,
caracterizado porque dicho anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo reacciona específicamente frente al antígeno flagelar H:1, 2 presente en Salmonella enterica serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:-.
2. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo obtenido según el procedimiento de la reivindicación 1 caracterizado porque reacciona específicamente frente al antígeno flagelar H:1, 2 presente en Salmonella enterica serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:-.
3. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 2, caracterizado porque el animal inmunizado para su obtención está seleccionado entre: conejo, cabra y ratón.
4. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 2, caracterizado porque dicho anticuerpo posee un isotipo seleccionado entre: IgG, e IgM.
5. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizado porque el hibridoma aislado en el paso c) de su procedimiento de obtención es la línea celular 23D4, ECACC no. 05122301.
6. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 5, caracterizado porque dicho anticuerpo es murino.
7. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 5 o 6, caracterizado porque dicho anticuerpo es del isotipo IgM.
8. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 7, caracterizado porque dicho anticuerpo monoclonal se encuentra en sobrenadante, ascites o purificado.
9. Un fragmento de un anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 caracterizado porque está seleccionado entre: un fragmento Fab, un fragmento F (ab') 2 y un fragmento Fv.
10. Una línea celular capaz de producir un anticuerpo monoclonal que reacciona específicamente frente al antígeno H:1, 2 presente en el serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:- de Salmonella enterica definido en las reivindicaciones 2 a 8 caracterizada porque dicha línea celular es la línea 23D4, ECACC no. 05122301.
11. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 9, para detectar la presencia de los serotipos Typhimurium o 4, 5, 12:i:- de Salmonella enterica en una muestra.
12. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 11, caracterizado porque dicha muestra está seleccionada entre una muestra alimentaria y una muestra clínica.
13. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 11 u 12, caracterizado porque dicha muestra clínica está seleccionada entre sangre, suero, plasma y orina.
14. Uso de un anticuerpo monoclonal, un fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 11 a 13, caracterizado porque dicha detección se realiza mediante un ensayo seleccionado entre: ELISA, Western-blot y Dot-blot.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2010-12-29T00:00:00ZMétodo de amplificación genómica del virus West NileTenorio, AntonioVazquez, AnaNegredo, Anabelhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81282021-05-18T15:18:56Z2011-09-15T00:00:00ZMétodo de amplificación genómica del virus West Nile. El método se basa en la amplificación de una zona de la región 3' no codificante del virus, preferiblemente mediante PCR en Tiempo Real, gracias al uso de una pareja de cebadores mínimamente degenerados, lo que permite la amplificación de virus West Nile presentes en una muestra de cualquiera de los linajes conocidos. El fragmento amplificado se detecta, preferiblemente, con una sonda específica de la zona, también mínimamente degenerada. La pareja de cebadores degenerados elegidos, así como la sonda preferida, dan lugar a una alta sensibilidad en la detección de todos los linajes y también a una alta especificidad para el virus West Nile.; REIVINDICACIONES: 1. Un método para la detección del virus West Nile presente en una muestra que comprende las etapas de:
a) amplificar los ácidos nucleicos del virus West Nile presentes en dicha muestra utilizando como cebadores los oligonucleótidos con las secuencias:
5'-CGGAAGTYGRGTAKACGGTGCTG-3' (SEQ ID NO:1) (directo) , y
5'-CGGTWYTGAGGGCTTACRTGG-3' (SEQ ID NO:2) (inverso) ;
b) detectar el fragmento de ácido nucleico amplificado,
en donde la detección del ácido nucleico amplificado indica la presencia del virus West Nile en dicha muestra.
2. Método según la reivindicación 1, en el que la detección del ácido nucleico amplificado se realiza utilizando como sonda la secuencia representada por SEQ ID NO:3.
3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la etapa a) de amplificación de los ácidos nucleicos del virus West Nile presentes en la muestra comprende las siguientes subetapas:
i) síntesis del cDNA a partir del RNA del virus West Nile presente en la muestra mediante una transcriptasa inversa;
ii) amplificación del cDNA mediante PCR en Tiempo Real utilizando como cebadores los oligonucleótidos de SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2; y
la etapa b) de detección del fragmento de ácido nucleico amplificado se lleva a cabo mediante el uso de una sonda fluorogénica que consiste en un oligonucleótido monocatenario, complementario al fragmento de ácido nucleico amplificado en la reacción de PCR, covalentemente unido a al menos un compuesto fluorocromo.
4. Método según la reivindicación 3, en el que el oligonucleótido utilizado como sonda tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3.
5. Método según la reivindicación 4, en el que el oligonucleótido utilizado como sonda está covalentemente unido en 5' a un primer compuesto fluorocromo y en 3' a un segundo compuesto fluorocromo quencher capaz de aceptar la energía emitida por el primer fluorocromo cuando ambos están unidos al oligonucleótido de SEQ ID NO:3 y de disiparla en forma de fluorescencia de mayor longitud de onda que la emitida por el primer fluorocromo.
6. Método según la reivindicación 4, en el que el oligonucleótido utilizado como sonda está covalentemente unido en 5' a un compuesto fluorocromo y en 3' a un compuesto quencher no fluorescente, capaz de aceptar la energía emitida por el compuesto fluorocromo cuando ambos están unidos al oligonucleótido de SEQ ID NO:3 y que contiene un resto MGB capaz de unirse al surco menor del DNA.
7. Método según la reivindicación 6, en el que compuesto fluorocromo unido en 5' es 6-carboxifluoresceína (FAM) .
8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la amplificación de los ácidos nucleicos del Virus West Nile se lleva a cabo en presencia de una molécula de DNA útil como control interno que comprende un fragmento que puede ser amplificado mediante PCR con los cebadores de SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2 por comprender secuencias complementarias a ambos cebadores, situadas de manera que cada cadena de la molécula de DNA contiene la secuencia de uno de dichos cebadores y la secuencia complementaria al otro cebador, estando dichas secuencias correspondientes a los cebadores separadas por un fragmento heterólogo, exógeno tanto con respecto al genoma del virus West Nile como al genoma de la especie de la que se ha extraído la muestra en la que se desea comprobar la presencia del virus West Nile.
9. Método según la reivindicación 8, en el que la molécula de DNA útil como control interno comprende la secuencia representada por SEQ ID NO:6.
10. Método según la reivindicación 9, en el que se detecta la amplificación del DNA útil como control interno mediante el uso de una sonda con la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:7.
11. Método según la reivindicación 10, en el que la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:7 lleva covalentemente unido un compuesto fluorocromo distinto de cualquier fluorocromo presente en la sonda de SEQ ID NO:3.
12. Método según la reivindicación 11, en el que el compuesto fluorocromo es NED.
13. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, que comprende una etapa previa en la que se lleva a cabo una reacción de amplificación por PCR de los oligonucleótidos de SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:5, que sirven tanto como cebadores como moldes, dando lugar a un producto de amplificación que comprende la secuencia de SEQ ID NO:6.
14. Método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los ácidos nucleicos amplificados en la etapa a) del método han sido extraídos de una muestra biológica.
15. Método según la reivindicación 14, en el que la muestra biológica ha sido tomada de un ser humano.
16. Método según la reivindicación 15, en el que la muestra biológica se selecciona de líquido cefalorraquídeo, muestras de órganos, muestras de sangre o suero obtenido de la misma.
17. Método según la reivindicación 14, en el que la muestra biológica procede de un artrópodo o de un ave.
18. Un kit que comprende los oligonucleótidos de SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2.
19. Kit según la reivindicación 18, que adicionalmente comprende una sonda que contiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3.
20. Kit según la reivindicación 19, en el que la sonda de SEQ ID NO:3 presenta unido al extremo 5' un compuesto fluorocromo y en 3' un compuesto quencher no fluorescente, capaz de aceptar la energía emitida por el compuesto fluorocromo cuando ambos están unidos al oligonucleótido de SEQ ID NO:3, compuesto quencher no fluorescente que contiene un resto MGB capaz de unirse al surco menor del DNA.
21. Kit según la reivindicación 20, que adicionalmente contiene una sonda con la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:7.
22. Kit según la reivindicación 21, en el que la sonda con la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:8 lleva unido covalentemente un compuesto fluorocromo distinto de cualquier fluorocromo presente en la sonda de SEQ ID NO:3.
23. Kit según la reivindicación 21 ó 22, que adicionalmente comprende los oligonucleótidos de SEQ ID NO:4 y SEQ ID NO:5.
24. Kit según la reivindicación 21 ó 22, que adicionalmente comprende una molécula de DNA que comprende la secuencia representada por SEQ ID NO:6.
25. Kit según la reivindicación 24, en el que la molécula de DNA es un plásmido.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2011-09-15T00:00:00ZCebadores, sondas y kits para la detección de especies bacterianas que pertenecen al género RickettsiaAnda, PedroEscudero, RaquelJado, IsabelRodriguez-Moreno, IsabelJimenez, Maribelhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81262024-02-26T10:16:50Z2014-11-14T00:00:00ZUn par de cebadores que tienen un cebador que comprende SEQ ID NO: 36 y un cebador que comprende SEQ ID NO: 37, y capaces de amplificar SEQ ID NO: 55, 56, 82-93 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que pertenecen al género Rickettsia.; REIVINDICACIONES: 1. Un par de cebadores que tienen un cebador que comprende SEQ ID NO: 36 y un cebador que comprende SEQ ID NO: 37, y capaces de amplificar SEQ ID NO: 55, 56, 82-93 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que
pertenecen al género Rickettsia.
2. El par de cebadores de acuerdo con la reivindicación 1 que tienen la secuencia SEQ ID NO: 36 y SEQ ID NO: 37.
3. Sonda que consiste en la secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 38-51, y capaz de hibridar con SEQ ID NO: 55,
56, 82-93 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que pertenecen al género Rickettsia.
4. Un kit que comprende el par de cebadores de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2.
5. El kit de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende además los cebadores SEQ ID NO: 52 y SEQ ID 53.
6. Un kit que comprende la sonda de acuerdo con la reivindicación 3.
7. El kit de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además la sonda SEQ ID NO: 54.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2014-11-14T00:00:00ZCebadores, sondas y kits para la detección de especies bacterianas que pertenecen al género BartonellaAnda, PedroEscudero, RaquelJado, IsabelRodriguez-Moreno, IsabelJimenez, Maribelhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81252024-02-26T10:16:09Z2006-06-15T00:00:00ZUn par de cebadores que tienen un cebador que consiste en la SEQ ID NO: 7 y un cebador que consiste en la SEQ ID NO: 8, y capaces de amplificar SEQ ID NO: 61-76 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que pertenecen al género Bartonella.; REIVINDICACIONES:
1. Un par de cebadores que tienen un cebador que consiste en la SEQ ID NO: 7 y un cebador que consiste en la SEQ ID NO: 8, y capaces de amplificar SEQ ID NO: 61-76 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que
pertenecen al género Bartonella.
2. Sonda que consiste en una secuencia seleccionada de SEQ ID NO: 9-24, y capaz de hibridarcon SEQ ID NO: 61- 76 de especies bacterianas que provocan zoonosis, que pertenecen al género Bartonella.
3. Kit que comprende el par de cebadores de acuerdo con la reivindicación 1.
4. Kit de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende además los cebadores SEQ ID NO: 52 y SEQ ID NO: 53.
5. Kit que comprende la sonda de acuerdo con la reivindicación 2.
6. Kit de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende además la sonda SEQ ID NO: 54.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2006-06-15T00:00:00ZMétodo y kit de detección de especies bacterianas mediante análisis de ADNAnda, PedroEscudero, RaquelJado, IsabelRodriguez-Moreno, IsabelJimenez, Maribelhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/81232024-02-26T10:19:33Z2007-01-01T00:00:00ZMétodo y kit de detección de especies bacterianas mediante análisis de ADN. La presente invención se refiere a la detección e identificación de diferentes especies bacterianas por PCR múltiple. Más concretamente, el método proporciona los cebadores, las sondas, las regiones génicas o regiones intergénicas necesarias para llevar a cabo la detección simultánea de especies bacterias y grupos bacterianos pertenecientes a los géneros Anaplasma, Ehrlichia, Borrelia, Bartonella, Coxiella, Rickettsia y Francisella por PCR múltiple.; REIVINDICACIONES:
1. Método para la detección simultanea de especies bacterianas causantes de zoonosis pertenecientes a los géneros: Anaplasma, Ehrlichia, Bartonella, Borrelia, Coxiella, Francisella y Rickettsia que comprende:
a. Poner en contacto la muestra a analizar con una mezcla de reacción que comprenda cebadores específicos que amplifiquen las secuencias: SEQ ID 55-93.
b. Amplificar mediante reacción en cadena de la polimerasa.
c. Identificar la formación de productos del paso anterior, siendo dicha formación indicativa de la presencia o ausencia de bacterias causantes de zoonosis.
2. Método según la reivindicación 1 donde las especies bacterianas detectadas son:
a. Anaplasma phagocytophilum, A. bovis, A. equi, A. marginale, A. centrale y A. ovis.
b. Ehrlichia chaffeensis y E. ewingii.
c. Bartonella henselae, B. quintana, B. clarridgeiae, B. elizabethae, B. grahamii, B. vinsonii subespecie berkhofii, B. vinsonii subespecie vinsonii, B. vnisonii subespecie arupensis, B. bacilliformis, B. alsatica, B. bovis, B. doshiae, B. koehlerae, B. schoenbuchensis, B. taylori y B. tribocorum.
d. Especies del género Borrelia.
e. Coxiella burnetii.
f. Francisella turalensis subesp. holarctica y F. tularensis subesp. novicida, la variante 3523 de Francisella turalensis y el grupo endosimbionte de Francisella.
g. Especies causantes de las fiebres manchadas y el grupo causante del tifus, las especies Rickettsia akari, R. bellii, R. slovaca, R. conorii, R. aeschlimannii, R. ricketsii, R. sibirica, R. helvetica, R. felis, R. australis, R. prowazekii, y R. typhy.
3. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde los cebadores comprenden las secuencias SEQ ID 1, 2, 7, 8, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 36, 37.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde la detección simultanea de los productos de amplificación se realiza mediante sondas que comprenden las secuencias SEQ ID 3-6, 9-24, 27, 30, 33-35, 38-51.
5. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende al menos un control de amplificación interno.
6. Método según la reivindicación 5, en donde el control de amplificación interno comprende:
a. La amplificación de la SEQ ID 94 con cebadores específicos.
b. Detección de la formación del producto de amplificación del paso anterior.
7. Método según la reivindicación 6, en donde los cebadores específicos tienen las secuencias 52 y 53.
8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 5-7, donde la detección del producto de amplificación es llevada a cabo mediante la sonda de SEQ ID 54.
9. Cebadores de SEQ ID 1, 2, 7, 8, 25, 26, 28, 29, 31, 32, 36 y 37, caracterizados porque son capaces de amplificar las secuencias definidas según la reivindicación 1.
10. Cebador de SEQ ID 52 y 53, caracterizados porque son capaces de amplificar la secuencia definida según la reivindicación 6.
11. Sondas de secuencia SEQ ID 3-6, 9-24, 27, 30, 33-35 y 38-51, caracterizadas porque son capaces de hibridar con las secuencias definidas según la reivindicación 1.
12. Sonda de SEQ ID 54, caracterizada porque es capaz de hibridar con la secuencia definida según la reivindicación 8.
13. Kit de diagnostico capaz de llevar a cabo el método según las reivindicaciones 1 a 8.
14. Kit según la reivindicación anterior que comprende cebadores según las reivindicaciones 9 y 10.
15. Kit según la reivindicación anterior que comprende sondas según las reivindicaciones 11 y 12.
Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2007-01-01T00:00:00ZMétodo de identificación de especies bacterianas de los géneros Anaplasma/Ehrlichia y Bartonella.Anda, PedroGil, HoracioEscudero, RaquelJado, IsabelRodriguez-Moreno, Isabelhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79752021-05-18T15:05:24Z2009-10-30T00:00:00ZMétodo de identificación de especies bacterianas de los
géneros Anaplasma/Ehrlichia y Bartonella.
La presente invención, referida a un método de detección
e identificación de las especies bacterianas pertenecientes
a los géneros Anaplasma/Ehrlichia y Bartonella. Junto
con este método, la invención también proporciona los cebadores
y sondas necesarios para llevarlo a cabo; Reivindicaciones disponibles del expediente:
1. Método para la detección simultánea de especies bacterianas causantes de zoonosis, pertenecientes a los géneros Anaplasma/Ehrlichia y Bartonella, que comprende los siguientes pasos:
a. Poner en contacto la muestra a analizar con una mezcla de reacción que comprenda cebadores específicos que amplifiquen las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO: 1-17 y 47 ó sus respectivas secuencias complementarias.
b. Amplificar mediante reacción en cadena de la polimerasa.
c. Identificar la formación de productos del paso anterior, siendo dicha formación indicativa de la presencia o ausencia de bacterias causantes de zoonosis.
2. Método para la detección simultánea de especies bacterianas según reivindicación 1, donde los cebadores consisten en las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO:18-25 y sus secuencias complementarias.
3. Método para la detección simultánea de especies bacterianas según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde la detección de los productos de amplificación se realiza mediante sondas que consisten en las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO:26-42 y 48 y sus secuencias complementarias.
4. Cebadores cuya secuencia consiste en cualquiera de las secuencias SEQ ID NO:20-21 y sus secuencias complementarias, donde dichos cebadores permiten la amplificación de cualquiera de las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO: 2-7 y 47.
5. Cebadores cuya secuencia consiste en cualquiera de las secuencias SEQ ID NO:22-23 y sus secuencias complementarias, donde dichos cebadores permiten la amplificación de la secuencia que comprende la SEQ ID NO: 8.
6. Sondas cuya secuencia consiste en cualquiera de las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO:26-42 y 48 y sus secuencias complementarias, donde dichas sondas son capaces de hibridar con las secuencias seleccionadas del grupo que comprende SEQ ID NO:1-17 y 47 y su secuencias complementarias, según se indica en las tablas 2 y 3.
7. Kit de análisis capaz de llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
8. Kit según la reivindicación anterior que comprende cebadores según las reivindicaciones 4 y 5.
9. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 7-8 que comprende sondas según la reivindicaciones 6.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2009-10-30T00:00:00ZProcedimientos de amplificación de genoma y mezclas de oligonucleótidos iniciadores para la detección y la identificación de secuencias genómicas relacionadasTenorio, Antoniohttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79742021-05-18T15:50:33Z1994-03-16T00:00:00ZProcedimientos de amplificacion de genoma para la deteccion e identificacion de secuencias genomicas relacionadas. Al menos uno de los iniciadores que intervienen en la deteccion se diseña como mezcla simple de oligonucleotidos que contienen secuencias homologas seleccionadas de entre las secuencias genomicas relacionadas que se quieren amplificar, y que pueden contener secuencias no homologas y/o alteraciones respecto a las secuencias conocidas. Al menos una de los iniciadores que intervienen en la reaccion de identificacion, consecutiva o no a la de deteccion, se diseña como mezcla simple de oligonucleotidos que terminan en su extremo 3'' en una secuencia especifica de la secuencia que se quiere identificar, y que pueden contener alteraciones respecto a las secuencias conocidas; los iniciadores estan diseñados de manera que los fragmentos especificos amplificados son diferentes entre si por tamaño uotro marcaje fisico o quimico. Los nuevos procedimientos son especialmente utiles para la deteccion y la identificacion de agentes infecciosos relacionados en una unica reaccion multiple.; Reivindicaciones:
1. Un procedimiento de amplificación de genoma para la detección de secuencias genómicas relacionadas en una única mezcla de reacción, caracterizado por que se realizan sucesivos ciclos de reacción en los que se desnaturaliza el genoma presente en la reacción, se hibridan a las hebras de genoma desnaturalizado los iniciadores de la reacción de polimerización de genoma y se realiza una reacción de polimerización de genoma, en que al menos uno de los iniciadores que intervienen en la reacción se obtiene de manera que
es una mezcla simple de oligonucleótidos, basándose esencialmente cada uno de dichos oligonucleótidos en secuencias seleccionadas de entre cada una de las secuencias relacionadas que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla incluye, preferentemente en su extremo 3', secuencias homólogas seleccionadas de entre las secuencias relacionadas que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla puede incluir, preferentemente en su extremo 5', secuencias no homólogas seleccionadas de entre las secuencias relacionadas que se quieren amplificar, y
uno o más de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla pueden diferenciarse de las secuencias conocidas que se quieren amplificar en la menos un nucleótido.
2. Un procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado además por que posteriormente se identifican las secuencias amplificadas por hibridación o por una reacción de amplificación consecutiva.
3. Un procedimiento según las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado además porque se utilizan para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
4. Un procedimiento de amplificación de genoma para la detección y la identificación de secuencias genómicas en una única mezcla de reacción, caracterizado porque se realizan sucesivos ciclos de reacción en los que se desnaturaliza el genoma presente en la reacción, se hibridan a las hebras de genoma desnaturalizado los iniciadores de la reacción de polimerización de genoma y se realiza una reacción de polimerización de genoma, en que al menos uno de los iniciadores que intervienen en la reacción se obtiene de manera que
es una mezcla simple de oligonucleótidos, basándose esencialmente cada uno de dichos oligonucleótidos en secuencias seleccionadas de entre cada una de las secuencias que se quieren amplificar,
cada uno de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla incluye, preferentemente en su extremo 3', secuencias específicas de cada una de las secuencias que se quieren tipificar en la reacción de amplificación,
los fragmentos específicos amplificados son diferentes entre sí por tamaño o por diferente marcaje físico o químico de cada uno de sus oligonucleótidos componentes, y
uno o más de los oligonucleótidos componentes de dicha mezcla pueden diferenciarse de las secuencias conocidas que se quieren amplificar en la menos un nucleótido.
5. Un procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado además porque se utiliza para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
6. Un procedimiento de detección e identificación desecuencias genómicas relacionadas en dos reacciones de amplificación consecutivas, caracterizado por
hacerse una primera reacción de amplificación de, genoma según la reivindicación 1 y
tomando como substrato el producto de la primera reacción de amplificación, realizar una segunda reacción de amplificación de genoma según la reivindicación 4.
7. Un procedimiento según la reivindicación 6 caracterizado además porque se utiliza para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados, más especialmente para la detección de virus relacionados y aún más especialmente para la detección de virus capaces de infectar a mamíferos, especialmente a humanos.
8. Procedimientos según las reivindicaciones 1 a 7 caracterizados además
porque las secuencias de los oligonucleótidos componentes de las mezclas se seleccionan de entre las secuencias de los miembros de la familia Retroviridae, especialmente de los genes gag y pol, y
porque se utilizan para la detección y la identificación de Retroviridae, especialmente de Retroviridae capaces de infectar a humanos.
9. Procedimientos según las reivindicaciones 1 a 7 caracterizados además
porque las secuencias de los oligonucleótidos componentes de las mezclas se seleccionan de entre las secuencias de los miembros de la familia Herpesviridae, especialmente del bloque conservado que comprende los genes homólogos a los genes UL27, UL28, UL29 y UL30 del virus herpes simplex tipo 1, y
porque se utilizan para la detección y la identificación de Herpesviridae, especialmente de herpesviridae capaces de infectar a humanos.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
1994-03-16T00:00:00ZNuevos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales para el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y otras enfermedadesGallego-Sala, JoseGonzalez-Bulnes, LuisFustero-Lardies, SantosIbañez-Sanchez, IgnacioCatalan-Muñoz, SilviaAlcamí, Joséhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79352021-05-18T15:50:55Z2014-09-02T00:00:00ZLa invención consiste en nuevos compuestos p-terfenilos hexakis-sustituidos con grupos bilaterales y composiciones farmacéuticas que los contengan con utilidad como agentes farmacéuticos.
Debido a su capacidad de interaccionar con un bucle interno de ARN y de mimetizar una α-hélice proteica, estos compuestos son efectivos especialmente en el tratamiento de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) así como otras enfermedades, tales como enfermedades causadas por otros virus ARN, enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser usados para modular la función de bucles internos de ARN, o enfermedades infecciosas o crónicas donde estos compuestos puedan ser utilizados como agonistas o inhibidores de dominios proteicos de α-hélice en interacción con otras biomoléculas.; REIVINDICACIONES:
- ES-2489815_A1
1. Compuesto de Fórmula general (I)
R7
I
R1-----A-----R`
R3-----B-----R4
I
R1----C----RG
I
R8
(I)
donde:
A, B y C representan independientemente uno del otro anillos de seis átomos seleccionados del grupo que consiste en benceno, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, ciclohexano, oxano, piperidina y piperazina,
los anillos de seis átomos A, B y C están unidos en para mediante enlaces simples,
los sustituyentes R1, R2, R3, R4, R5 y R6 ocupan posiciones orto o meta respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
los sustituyentes R7 y R8 ocupan posiciones para respecto a los átomos que enlazan entre sí los anillos de seis miembros,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil
amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales (1,3 ó 1,4 disustituidas una respecto a la otra) en el anillo de seis átomos y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en: hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo y alquilo,
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alcoxi, alquil amina, alquil guanidina, alquil amida, alquil éster, alquil carboxilato, hidroxialquilo, alcoxialquilo, haloalquilo, alquilo, aril alcoxi y aril éster,
y sus sales, ésteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
2. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque en la Fórmula general (I)
A, B y C son benceno,
R1 y R2 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y meta respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
R3 y R4 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno A, y se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno,
halógeno, hidroxilo, (C1-C6) alcoxi, (C1-C6) alquil amida sustituida o no sustituida, (C1-C6) alquil ester sustituido o no sustituido, (C1-C6) hidroxialquilo, (C1-C6) haloalquilo, (C1-C6) alcoxialquilo, y (C1-C8) alquilo,
R5 y R6 ocupan posiciones bilaterales 1,3 disustituidas una respecto a la otra y orto respecto al carbono de su anillo unido al benceno B, y son grupos aminometilo, aminoetilo o aminopropilo, substituidos o no substituidos,
R7 y R8 se seleccionan independientemente uno del otro de un grupo consistente en hidrógeno, halógeno, hidroxilo, (C1-C10) alcoxi, (C1-C10) alquil amina, (C1- C10) alquil guanidina, (C1-C10) alquil amida, (C1-C10) alquil éster, (C1-C10) hidroxialquilo, (C1-C10) alcoxialquilo, (C1-C10) haloalquilo, (C1-C10) alquilo, aril alcoxi, y aril éster.
y sus sales, ésteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
3. Compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado por estar seleccionado del grupo que comprende:
2",3,5,6"-tetrakis(2-aminoetil)-4"-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol
2",3,5,6"-tetrakis(2-aminoetil)-2',4"-dimetoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol
2,2',2",2"'-(4"-(benciloxi)-3',4-dimetoxi-[1,1 ':4', 1 "-terfenil]-2,3",5",6- tetrail)tetraetilamina
2,2',2",2'"-(3',4-dimetoxi-4"-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)-[1,1':4',1"-terfenil]- 2,3'',5", 6-tetrail)tetraetilam ina
2,2',2M,2'"-(4M-(ciclohexilmetoxi)-3',4-dimetoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-
tetrail)tetraetilamina
2",3,5,6"-tetrakis(2-aminoetil)-4"-metoxi-2',6'-dimetil-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol
2,2',2M,2"'-(4"-(benciloxi)-4-metoxi-3',5'-dimetil-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-
tetrail)tetraetilamina
2",3,5,6"-tetrakis(2-aminoetil)-2'-etil-4"-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol
2,2',2M,2'"-(4M-(benciloxi)-3'-etil-4-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-
tetrail)tetraetilamina
2",3,5,6"-tetrakis(2-aminoetil)-2',6'-dietil-4"-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-4-ol
2,2',2",2"'-(4"-(benciloxi)-3',5'-dietil-4-metoxi-[1,1':4',1"-terfenil]-2,3",5",6-
tetrail)tetraetilam¡na,
y sus sales, esteres, isómeros, solvatos, hidratos y profármacos.
4. Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso como medicamento.
5. Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y/o otras enfermedades causadas por otros virus ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios proteicos de a-hélice en interacción con otras biomoléculas.
6. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la
preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o
terapéutico de infecciones causadas por virus ARN.
7. Uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizado por que el tratamiento profiláctico y/o terapéutico esta destinado al virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1).
8. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la
preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o
terapéutico de, enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la
modulación de la función de bucles internos de ARN.
9. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la
preparación de un medicamento destinado al tratamiento profiláctico y/o
terapéutico de enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición
o mimetismo de dominios proteicos de a-hélice en interacción con otras biomoléculas.
10. Composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de Fórmula general (I), de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o su sal farmacéuticamente aceptable, éster, solvato, isómero, hidrato o profármaco y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
11. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) y/o enfermedades causadas por otros virus ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la modulación de la función de bucles internos de ARN, y/o enfermedades infecciosas o crónicas responsivas a la inhibición o mimetismo de dominios proteicos de a-hélice en interacción con otras biomoléculas.
12. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 y 11 caracterizada por contener de 0,05% - 80% (en peso) de al menos un compuesto de Fórmula general (I).
13. Composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 formulada para su administración parenteral, oral, tópica, nasal y/o rectal.
14. Método de obtención de los compuestos de Fórmula general (I) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende la formación de sucesivos enlaces C-C por acoplamientos de Suzuki entre halogenuros, ariltriflatos y ésteres borónicos de los anillos de 6 miembros A, B y C conteniendo grupos bilaterales, catalizados por paladio, caracterizado por qué los derivados halogenuro de A y C introducen R1, R2, R5, y R6 y el éster borónico de B introduce R3 y R4 en los compuestos de Fórmula general (I).; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2014-09-02T00:00:00ZUso de moduladores de la función de CD69 para la movilización y proliferación de precursores hematopoyéticos.Notario, LauraLauzurica, Pilarhttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79282021-05-18T15:35:43Z2018-09-20T00:00:00ZLa presente invención se refiere al uso de moduladores que inhiben la función de la molécula CD69, preferiblemente de un anticuerpo anti-CD69, para la elaboración de un medicamento para provocar la proliferación y salida o movilización de células hematopoyéticas desde médula ósea en un sujeto, de modo que es útil para la prevención y/o tratamiento de leucopenias, trombopenia, y/o pancitopenia.; REIVINDICACIONES: 1. Uso de un inhibidor de C069 para la elaboración de un medicamento para provocar la proliferación de precursores hematopoyéticos y su salida desde médula ósea en un sujeto, donde el inhibidor es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a C069, un RNA de inteñerencia, un microRNA o una cadena de ácido nucleico antisentido.
2. Uso de un inhibidor de C069 según la reivindicación 1 donde el medicamento es para la prevención o el tratamiento de leucopenia, trombopenia y/o pancitopenia en un sujeto.
3. Uso según la reivindicación 2 donde la leucopenia es neutropenia, linfopenia, eosinopenia y/o monocitopenia.
4. Uso según la reivindicación 1 donde el medicamento es para la obtención de dichos precursores para un trasplante.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde el anticuerpo
monoclonal se selecciona de la lista que consiste en: anticuerpo humanizado, anticuerpo humano, anticuerpo quimérico, anticuerpo deinmunizado, fragmentos de anticuerpos y nanocuerpo.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde el inhibidor de C069 es el anticuerpo monoclonal 2.8 que se une específicamente a C069 humano, donde dicho anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende la SEO ID NO: 9 y una cadena ligera que comprende la SEO ID NO: 10.
7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde el sujeto ha sido o va a 30 ser tratado con quimioterapia y/o radioterapia.
8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 donde el medicamento se administra de forma oral, parenteral, intra-muscular, intra-peritoneal, intra-arterial, intra-venosa, intra-traqueal, intra-nasal, transdérmica, intra-dérmica, intra-vaginal,
intravesicular, epidural, subcutánea, cutánea, tópica, ótica, oftálmica, inhalatoria, sublingual, vaginal, rectal, gastroentérica o mucosa.
9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 donde el medicamento se administra durante 5, 6 o 7 días.
10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde el sujeto es un ser 5 humano.
11. Uso in vitr o de un inhibidor de CD69 para la obtención de precursores hematopoyéticos, donde el inhibidor de CD69 es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a CD69, un RNA de interferencia, un microRNA o una cadena de ácido nucleico antisentido.
12. Método in vitro de obtención de precursores hematopoyéticos útiles para un trasplante que compren de:
a. Recolectar desde una muestra aislada de sangre, linfa u órganos linfáticos las células madre hematopoyéticas de un sujeto que recibió previamente un inhibidor de CD69; y
b. almacenar las células obtenidas en el paso (a) hasta su utilización,
donde el inhibidor de CD69 es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente 20 a CD69, un RNA de interferencia, un microRNA o una cadena de ácido nucleico antisentido.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2018-09-20T00:00:00ZMétodo para la detección simultánea de histoplasma capsulatum y paracoccidioides brasiliensisCuenca-Estrella, ManuelBuitrago, Maria JoseRodriguez-Tudela, Juan LuisGomez-Lopez, Aliciahttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79262021-05-18T15:43:50Z2010-03-22T00:00:00ZLa presente invención se refiere a un método de detección simultánea de ADN de Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides brasiliensis mediante la técnica de PCR multiplex cuantitativa en tiempo real, basada en sondas específicas marcadas con dos fluoróforos diferentes. Esta técnica es aplicable tanto en muestras biológicas como en cultivos microbiológicos y muestras ambientales. Además, otro aspecto de la invención es un kit que permite detectar los dos microorganismos de forma simultánea.; REIVINDICACIONES: 1. Método para la detección simultánea de Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides brasiliensis que comprende:
a. obtener una muestra y aislar su ADN,
b. amplificar un fragmento de la región ITS del ADN ribosómico de Histoplasma capsulatum y/o Paracoccidioides brasiliensis contenido en el ADN aislado en el paso (a) ,
c. determinar la desviación del paso (b) con respecto a los controles y
d. analizar la desviación del paso (c) y atribuir la misma a la presencia de los citados microorganismos.
2. Método según la reivindicación 1 donde la concentración del ADN aislado para llevar a cabo la amplificación es de al menos 10 fg/μl.
3. Método según la reivindicación 1 donde la muestra es:
a. una muestra biológica,
b. un cultivo microbiológico o
c. una muestra ambiental.
4. Método según la reivindicación 3 donde la muestra biológica está relacionada con el aparato respiratorio.
5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde la amplificación de la región ITS2 del ADN ribosómico de Histoplasma capsulatum se realiza por medio de los cebadores SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 y la amplificación de la región ITS1 del ADN ribosómico de Paracoccidioides brasiliensis se realiza por medio de los cebadores SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde la amplificación se realiza por medio de PCR multiplex en tiempo real caracterizada porque se emplean sondas específicas marcadas con dos fluoróforos diferentes.
7. Método según la reivindicación 6 donde las sondas son:
a. SEQ ID NO: 3 para el fragmento amplificado de Histoplasma capsulatum y se marca en el extremo 5' con un fluoróforo y en el extremo 3' con un quencher y
b. SEQ ID NO: 6 para el fragmento amplificado de Paracoccidioides brasiliensis y se marca en el extremo 5' con un fluoróforo distinto del usado en el apartado (a) y en el extremo 3' con un quencher.
8. Método según la reivindicación 7 donde el fluoróforo del apartado (a) es FAM, el fluoróforo del apartado (b) es HEX y el quencher es BHQ1.
9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para la monitorización de la respuesta a un tratamiento de histoplasmosis y/o paracoccidioidomicosis.
10. Kit para la detección simultánea de Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides brasiliensis que comprende pares de cebadores que pueden amplificar, mediante la técnica de la PCR, un fragmento de la región ITS del ADN ribosómico de Histoplasma capsulatum y/o Paracoccidioides brasiliensis.
11. Kit según la reivindicación 10 que comprende los cebadores SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 para amplificar un fragmento de la región ITS2 del ADN ribosómico de Histoplasma capsulatum y los cebadores SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5 para amplificar un fragmento de la región ITS1 del ADN ribosómico de Paracoccidioides brasiliensis.
12. Kit según la cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11 donde la amplificación se realiza por medio de PCR multiplex en tiempo real y se emplean sondas específicas marcadas con dos fluoróforos diferentes.
13. Kit según la reivindicación 12 donde las sondas son:
a. SEQ ID NO: 3 para el fragmento amplificado de Histoplasma capsulatum y se marca en el extremo 5'con un fluoróforo y en el extremo 3' con un quencher y
b. SEQ ID NO: 6 para el fragmento amplificado de Paracoccidioides brasiliensis y se marca en el extremo 5' con un fluoróforo distinto del usado en el apartado (a) y en el extremo 3' con un quencher.
14. Kit según la reivindicación 13 donde el fluoróforo del apartado (a) es FAM, el fluoróforo del apartado (b) es HEX y el quencher es BHQ1.
15. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, para el diagnóstico de histoplasmosis y/o paracoccidioidomicosis en una muestra biológica, ambiental o en un cultivo microbiológico.
16. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, para la monitorización de la respuesta a un tratamiento de histoplasmosis y/o paracoccidioidomicosis.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2010-03-22T00:00:00ZMétodo y kit para la detección molecular de Tropheryma whippleiAnda, PedroGarcia-Amil, CristinaRoales Gómez, PalomaRodriguez-Vargas, ManuelaLobo, Brunohttp://hdl.handle.net/20.500.12105/79252021-05-18T15:35:39Z2011-02-23T00:00:00ZLa presente invención se refiere a un método para la detección de la bacteria Tropheryma whipplei en una muestra biológica aislada mediante la amplificación con pares de cebadores específicos de uno o más fragmentos de las secuencias nucleotídicas SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3, donde dichas secuencias corresponden, respectivamente, a secuencias parciales de la secuencia nucleotídica del gen que codifica para la proteína HSP (Heat shock protein) de 65 kDa, de la secuencia nucleotídica de NCDRC (Non coding degenerated repeat cluster) y de la secuencia nucleotídica del gen que codifica para una proteína de la familia WISP (WNT1 inducible signaling pathway) de Tropheryma whipplei. Preferiblemente la amplificación se lleva a cabo por medio de PCR multiplex.; La detección de los productos de la amplificación se lleva a cabo por medio de sondas específicas complementarias a dichos productos. Asimismo, la presente invención se refiere a un kit que comprende los cebadores y sondas específicas para la detección de Tropheryma whipplei.; REIVINDICACIONES:
1. Método para la detección de Tropher y ma whipplei que comprende:
a. Obtener una muestra biológica aislada,
b. poner la muestra del paso (a) , o parte de la misma, en contacto con una mezcla de reacción que contiene cebadores capaces de amplificar uno o más fragmentos de las secuencias nucleotídicas SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3,
c. amplificar los fragmentos de las secuencias nucleotídicas según el paso (b) mediante la reacción en cadena de la polimerasa, y
d. detectar y/o cuantificar los productos de la amplificación del paso (c) .
2. Método según la reivindicación 1, donde los cebadores del paso (b) son:
a. SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5 para amplificar el fragmento SEQ ID NO: 1,
b. SEQ ID NO: 6 y SEQ ID NO: 7 para amplificar el fragmento SEQ ID NO: 2, y
c. SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 9 para amplificar el fragmento SEQ ID NO: 3.
3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde la amplificación se lleva a cabo por medio de PCR multiplex.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde la detección y/o cuantificación se lleva a cabo por medio de una o más sondas moleculares capaces de hibridar con cualquiera de los fragmentos de las secuencias nucleotídicas.
5. Método según la reivindicación 4, donde las sondas moleculares para llevar a cabo la detección y/o cuantificación son:
a. SEQ ID NO: 10 para detectar y/o cuantificar SEQ ID NO: 1,
b. SEQ ID NO: 11 para detectar y/o cuantificar SEQ ID NO: 2, y
c. SEQ ID NO: 12 para detectar y/o cuantificar SEQ ID NO: 3.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5, donde además comprende sondas control capaces de hibridar con las secuencias modificadas de uno o más fragmentos de las secuencias nucleotídicas SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3.
7. Método según la reivindicación 6, donde las sondas control, capaces de hibridar con las secuencias modificadas de dichos fragmentos, son SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 y SEQ ID NO: 15.
8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, donde la detección y/o cuantificación se lleva a cabo por medio de la hibridación de las sondas moleculares con las secuencias nucleotídicas amplificadas, en fase sólida.
9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde la muestra biológica aislada es un fluido biológico o una biopsia de tejido biológico.
10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para la monitorización de la respuesta a un tratamiento de la enfermedad de Whipple, provocada por Tropher y ma whipplei.
11. Kit para la detección de Tropher y ma whipplei que comprende cebadores capaces de amplificar uno o más fragmentos de las secuencias nucleotídicas SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3.
12. Kit según la reivindicación 11, donde los cebadores son:
a. SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5 para amplificar la secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 1,
b. SEQ ID NO: 6 y SEQ ID NO: 7 para amplificar la secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 2, y
c. SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 9 para amplificar la secuencia nucleotídica SEQ ID NO: 3.
13. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 11 ó 12 que además comprende sondas moleculares capaces de hibridar con cualquiera de los fragmentos de las secuencias nucleotídicas.
14. Kit según la reivindicación 13, donde las sondas moleculares son SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 12.
15. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14 que además comprende las sondas control SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 y SEQ ID NO: 15, capaces de hibridar con secuencias modificadas de los fragmentos de dichas secuencias nucleotídicas; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
2011-02-23T00:00:00ZProcedimientos de amplificación de genoma y mezclas de oligonucleótidos iniciadores para la detección y la identificación de agentes infecciosos relacionados.Casas Flecha, InmaculadaTenorio, AntonioEchevarria, Jose ManuelKlappler, Paul E.Cleator, Graham M.http://hdl.handle.net/20.500.12105/79232021-05-18T15:50:53Z1996-12-16T00:00:00ZProcedimientos de amplificacion de genoma y mezclas de oligonucleotidos iniciadores para la deteccion y la identificacion de agentes infecciosos relacionados. Se utiliza para la reaccion de deteccion una combinacion de mezclas de oligonucleotidos iniciadores, estando cada una de dichas mezclas especificamente diseñada para una familia de agentes infecciosos con secuencias genomicamente relacionadas y obteniendose como suma simple de oligonucleotidos homologos en su extremo (3''). La reaccion de amplificacion puede realizarse igualmente con la inclusion de un control de amplificacion interno. Los productos de la amplificacion pueden discriminarse posteriormente por hibridacion o por una segunda reaccion de amplificacion. Los procedimientos y mezclas de la invencion son especialmente utiles para realizar el diagnostico diferencial de agentes infecciosos que producen patologias similares, especialmente los virus herpes y enterovirus humanos.; Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.
1996-12-16T00:00:00Z